核心内容摘要
404禁用软件：当“错误”成为了一种“态度”
在上期教程中我们分享了如何使用ImageJ计算颗粒粒径及绘制粒径分布图但是整个处理过程需要自己动手画直径这样比较麻烦而且计算过程具有一定的主观性。
另外当需要处理多张图片的颗粒粒径时效率非常低下。
那么本期教程我们来学习使用Image J自动计算多张图片的颗粒粒径。
打开Image J软件跳出弹窗如下图所示
点击File—Import—Image Sequence—选择需要处理多张图片的文件夹选择第一张图片点击打开注可批量处理多张图片注意图片格式和图片标尺为一致在跳出的对话框确认一下图片数量是否正确
依次点击Image—Type—8bit
点击直线工具对标尺进行设定按住Shift临摹标尺
点击Analyze—Set scale在跳出的对话框在Known distance和Unit of length 分别设置为尺寸如300和μm
点击Image—Adjust—Threshold—在跳出的对话框点击调节阈值红色为选中部分尽量调节红色部分布满颗粒。
点击Process—Binary—Watershed分割相连的颗粒在跳出的对话框是否选择所有图片点击Yes。
点击Analyze—Analyze Particles—在跳出的对话框设置自动参数对Size和Circularity进行设置依次勾选下面的参数
在跳出的对话框点击File—Save As右侧的MinFeret为最小费雷特直径一般规则选择的圆形颗粒选择MinFeret即可对于比较不规则的颗粒可以自行计算最大费雷特直径FeretAngle和最小费雷特直径MinFeret的几何平均值来表示粒径大小。
打开Graphpad软件导入数据
点击New Analysis—Normality and Lognormality Tests在跳出的对话框点击ok
点击回到数据点击Analyze—Frequency distribution—在跳出的对话框—在Graph—勾选Graph the results—在Graph type处选择XYgraphHistogram spikes;
点击左侧的Histogram of Data 1右侧跳出柱状图
接着点击Analyze—在xy analyses—Nonlinear regressioncurve fit在跳出的对话框选择Gaussian—Gaussian在跳出的图形如下图所示
接着对图形进行细节美化其中包括柱状图颜色、曲线颜色、修改标题、坐标轴等其最终效果图如下图所示ImageJ 自动分析多张图片颗粒粒径不再依赖人工逐张操作而是由程序自动完成图像分割与统计分析全过程从而实现标准化、可重复、高效率的粒径测量。
其核心是通过固定算法参数如统一标尺、阈值分割方法、分水岭规则和颗粒筛选条件让软件自动识别图像中的每一个颗粒边界并批量输出面积、等效直径、Feret 直径等粒径指标。
相比人工测量自动计算的优势在于速度快、主观性低、结果可复现、适合大样本统计和粒径分布分析因此在材料、食品、纳米颗粒和生物显微图像分析中是最常用、也是最标准的粒径定量方法。
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